成骨细胞凋亡导致骨小梁变薄！穿透式电子显微镜进行组织学分析

成骨细胞凋亡导致骨小梁变薄！穿透式电子显微镜进行组织学分析

在不同的生理、病理环境下多种类型的硬组织细胞也可发生凋亡。而先前体内及体外的实验均已证实成骨细胞、

软骨细胞及蚀骨细胞都有凋亡现象；在正常或病理性的骨骼中，骨细胞亦存在凋亡现象。这意味着骨转换与可控的骨细胞死亡间存在功能上的联繫。

骨细胞的凋亡亦可能破坏了骨细胞的机械性或创伤性感受器作用，延迟了受损骨组织的清除，进而增加骨折的风险。

相较骨细胞而言，成骨细胞的凋亡作用则较;不清楚。先前的研究显示，随着年龄的增长，成骨细胞的凋亡会导致细胞基质沈积减少及骨小梁变薄，

这些均是与年龄相关的骨丧失特征。先前对牵引性骨形成过程中细胞增殖的研究显示，牵引速度可激发和影响细胞的增殖，

且再生过程中细胞群体的组成是不断变化的，由此推测增殖和凋亡细胞的比例亦可能是变化的。因此，明确凋亡细胞的群体，

细胞死亡的时间週期以及影响凋亡过程的相关因素对理解凋亡过程是很重要的。此研究假设牵引性骨形成中细胞凋亡可能是骨再生过程的重要因素之一，

且再生组织中细胞的凋亡激发了快速的骨组织重建。而此研究目的便是验证上述的假说。

材料与方法=====================================

实验采用兔胫骨延长的动物模型，每天延长0.7 mm，历时三週，每週拍摄X光片确定延长程度；且应用HE染色及穿透式电子显微镜进行组织学分析；TRAP（抗酒石酸盐酸性磷酸酯合成酶）染色识别骨骼中的蚀骨细胞；应用TUNEL标记法(Terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT)-mediated digoxingenin-dUTP nicked labeling TUNEL)进行DNA片段分析识别凋亡细胞。

结果=========================================

放射学及组织学分析显示延长间隙可分;三区：

纤维中央区(FZ)，X光片不显影、初始矿化区(PMF)、新骨形成区（NBZ，包括已矿化的编织骨和板层骨）。

穿透式电子显微镜可对上述三区细胞凋亡的不同阶段变化进行定性观察。其中，成骨细胞凋亡的各阶段变化均可看到，

尤以PMF和PMF与 NBZ的交界区凋亡的细胞数量最多。TUNEL标记法属于半定量分析，以－、＋、＋＋及 ＋＋＋四个等级来表示凋亡细胞的数量。

结果显示，凋亡细胞主要分佈于纤维组织与矿化前缘新骨间的移行区，邻近或粘附于中央区附近的新骨表面。在断端附近的成熟骨组织上TUNEL标记则明显减少。TRAP染色阳性的分佈区与TUNEL标记相似，同时蚀骨细胞的TRAP染色;阳性。