提问:将mRNA做成为cDNA的方法？|显微镜价格|金相显微镜
信息分类：生命科学资讯 作者:yiyi发布
提问:将mRNA做成为cDNA的方法？
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提问：将mRNA做成为cDNA的方法？
1. 准备2.5mM的dNTPmix与5x Reverse Transcriptase (RT) buffer(含250mM Tris-Cl, pH8.3, 375mM KCl, 15mM MgCl2), RT 200μg/μl, 0.1M DTT(通常随买RT并附), 10x Taq polymerase buffer.
2. 以PCR用0.5ml离心管, 准备mRNA, (最好1μg/μl), 10μl, 加入1μl(0.1μg/μl)工random primer(6-mer), 置70℃, 2min.
3. 加入5x RT buffer 5μl, 0.1M DTT 3.5μl, dNTPmix 5μl, RT 1μl, 置37℃1hr.
4. 置70℃, 5min, 使RT破坏.
5. 取2.5μl出来用置入另1PCR用0.5ml离心管, 加入8μl dNTPmix, 10μl Taq polymerase buffer, 加入针对此基因设计的2个primers各1μl, 加入1μl Taq polymerase, 再加入dH2O 77μl, 再加50μl mineral oil, 执行PCR, 94℃, 5min, 94℃, 1min, 55℃, 1min, 72℃, 2min, 30cycles, 即成. 所得成品可以电泳纯化.
不知道存在的普通对象的详细信息！捕捉图像之间继续使用内置的130万像素分辨率的数码相机。你甚至可以捕捉近距离对焦视频！的详