由电泳胶中提取DNA
信息分类：生命科学资讯 作者:yiyi发布
由电泳胶中提取DNA
本实验採用GENECLEAN III Kit,此套实习材, 保存于室温, 约有80﹪的DNA回收率.
材 料：
NaI液
New Wash浓缩液
TBE modifier
GCIII Elution Solution
其中NaI为6M sodium iodide solution
TBE modifier是用于泳胶, 若是以TBE与Agarose製成, 则加切下泳胶体积1/2之TBE modifier及4.5倍体积的NaI.
EZ-GLASSMILK是溶于dH2O的浮悬液, 沉淀下来, 应沉淀与水各半, 若水分蒸散, 可加入适当dH2O.
New Wash solution之配置：用14ml之浓缩液, 加280ml dH2O, 在与310ml 100﹪ethanol(或95﹪ethanol)溷合. 用此套实习材将DNA游泳胶中提出后, 不含ethidium bromide.
因为TBE对DNA粘附在EZ-GLASSMILK上有影响, 故在将泳胶加入NaI融化前先加入TBE modifier以去除此影响(降低pH).
方 法：
1. 以小刀片将含DNA的泳胶切出(在紫外线平台上执行), 秤重量, 以重量估算体积, 大约1g为1ml, 将此小块泳胶放入1.5ml离心管中(切块最好在0.4g以下).
2. 若电泳是在TAE中执行者, 则不用加TBE modifier, 直接加入3倍体机的NaI液, 若电泳在TBE中执行者, 则先加入1/2倍体积之NaI液. 将离心管置55℃水浴器中, 每隔一分钟取出溷合一下, 再放入, 约5分钟泳胶可完全融化.
[此套实习材也可用在为提纯DNA,
即将DNA液中直接加入3倍体积的NaI液, 然后进行下列步骤].
1. 加入适量之EZ-GLASSMILK, 加入之量以预估DNA含量有关, 即每1μg DNA要加2μl, 但最初至少要加5μl, 亦即若DNA含量少5μg, 亦至少要加5μl；若多于5μg, 再每多1μg, 加2μl.
2. 充分溷合, 并置室温5min, 每1分钟溷合一下.
3. 离心2,500rpm, 10sec.
4. 吸除上清液, 加入400μl之New Wsah液, 充分溷合, 再离心2,500rpm, 10sec, 吸除上清, 如此再重複2次(共洗3次), 吸除上清.
5. 加入20μl之GCIII Elution Solution, 充分溷合, 离心3,000rpm, 30sec, 吸取上清, 即为所要之DNA.