金相显微镜价格   生物显微镜价格   体视显微镜价格

显微镜报价-显微镜

本站搜索

这里是导航与内容的边距
这里是内右右边距的图片

显微镜百科 -体视显微镜做新生大鼠海马神经元的原代培养疑问?

体视显微镜做新生大鼠海马神经元的原代培养疑问?

信息分类:技术应用  日期: 2011-7-25 9:19:45

分割线

体视显微镜做新生大鼠海马神经元的原代培养疑问?
如何从新生大鼠脑内获取海马组织的资料?
解答:
需要多次于体视解剖显微镜下练习,处死小鼠,暴露脑组织,分离两侧的海马组织,白色,豌豆状,易碎。需小心。最主要是多练习几次。
原代细胞培养
步骤
(1)、取新生SD大鼠3只,入75%酒精消毒2分钟,断颈取脑。
(2)、将新生鼠脑放入盛有冷的D’Hanks平衡盐溶液的玻璃培养皿内,置冰盘上,于体视解剖显微镜下仔细剥除脑膜,分离两侧海马组织。
(3)、在显微镜将分离的海马组织放入另一个盛有冷的D’Hanks溶液的玻璃培养皿内,用眼科剪剪成小碎片,并移入15ml离心管中,组织沉底后吸除D’Hanks溶液。
(4)、向离心管中加入37℃ 0.25%胰酶溶液,每6个海马组织加1ml胰酶消化液,放入37℃培养箱中孵育10-15min,每3分钟翻转几下,至组织块间拉丝成团即可。900rpm离心2min。
(5)、吸除胰酶消化液,加入等量的37℃种植液以终止消化,置室温10min。
、加入2ml种植液,以抛光的滴管吹打约15次,分散细胞,静置10min(如仍有组织块,应用200目筛网过滤)。
(7)、调整细胞密度,以90-320/mm2的密度种于六孔板内。置37℃ 5%CO2培养箱中培养。
、24h后全部吸除种植液,更换成Neurobasal + 2% B27培养液培养。此后每周以此液半量换液2次。培养8-10天进行下一步实验。

另外,如果你从来没做过取海马的工作,建议你先在成年SD大鼠上练习,新生鼠海马又薄又小,还很嫩,稍不小心就碎掉了,如果你连它具体位置都不清楚,很容易失败。

本文由上海光学仪器厂原创,转载请注明( http://www.sgaaa.com)