以紫外线取得酵母菌突变种

以紫外线取得酵母菌突变种

材    料：

YPD medium及plates

选择mutants的plates(自行设计)

或以温度选择temperature sensitive metants

UV灯(使用UV灯时应戴安全眼镜)

方    法：

1.     将一种yeast长在5ml YPD medium中过夜, 30℃振盪300rpm.

2.     取1.5ml yeast液, 以微量离心机, 最高速离心5sec, 倒去上清, 再以dH2O(消毒过)洗2次. 之后将细胞溶于1ml dH2O中.

3.     测OD600, 若介于2.5~3.0, 则细胞述大约为8×107cells/ml, 将细胞逐次稀释置2,000cells/ml, 再以0.1ml涂皿.

4.     将涂有Yeasts的皿(保留2个为对照组), 置UV灯下, 照使达300eg/mm2, 再放室温, 长3天. 对照组为测其生存之用.

5.     取消毒过的圆形滤纸,  做replica-plate, 将一个皿放室温, 一个放37℃, 长3天. 凡在室温有长而37℃不长的可能就是temperature sensitive colonies, 此一步骤或以抗药性来选出抗药性突变种亦同.