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大肠杆菌的培养用0.7﹪(w/v)的洋菜量即可

信息分类:生命科学资讯  日期: 2011-12-16 23:05:42

分割线

大肠杆菌(Escherichia coli)的培养

    以LB培养液(Luria或Lenox broth)培养E.Coli, 高温高压消毒后使用.

    若製作平盘或洋菜斜面, 则在上述成分外, 再加1.5﹪(w/v)的洋菜粉.若尚需加入抗生素等, 可在消毒后, 待液体冷却至约50℃时, 加入溷和.

    若製作软洋菜覆盖层之洋菜, 则用0.7﹪(w/v)的洋菜量即可. 一般若添加抗生素, 其浓度如下:

 
 

储存液浓度
 

使用液浓度

Ampicillin
 

4mg/ml
 

50μg/ml

Chloramphenicol
 

10mg/ml

(溶于甲醇)
 

20μg/ml

    若是加其他化合物, 参考浓度如下:

 
 

储存浓度
 

使用液浓度

Isopropyl-I-
 

100mM
 

0.1mM

thio-β-D-
 

(23.8mg/ml)
 

(每平盘加储存液40μl)

galactoside (IPTG)
 

 
 

5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-
 

20mg/ml
 

20ug/ml

galactoside(X-ga
 

(溶于N.N.dimethyl)
 

(每平盘加储存液100μl)

l)
 

Formamide
 

    将E.coli培养在LB中, 37℃, 300rpm, 振盪培养过夜, 可得约         1-2×107cells/ml, 亦可用光谱仪测0D600, 大约每0.10D相当108cells/ml, 亦可用稀释涂平盘法计算Colony Forming Unit (CFU)/ml, 若想分离此菌, 可以稀释涂平法或平盘划线法为之. 保存此菌, 可将此菌加入下列两种溶液中任一种, 并保存在-70℃, 需用时, 吸取部分, 用于培养即可.

溶液一:glycerol solution

65﹪glycerol (v/v)

0.1M MgSO4

0.025M Tris.Cl, pH8

溶液二:DMSO Solution

7﹪(v/v) dimethylsulforide (DMSO)

※溶液一需经高温高压消毒, 溶液二不必.

实      验:E.coli成长曲线

材料与方法:

LB培养液及平盘

E.coli

自动计时器

生理实盐水(0.9﹪)4.9ml in 13×100螺盖试管(均经消毒)

Micropipettor

pipette tips

Spreader

37℃ incubatorn

37℃恆温振盪培养箱

本生灯

酒精

以稀释涂平盘法为之, 每30min计数一次, 以180分钟为之.

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