了解癒合组织的形成和培养基配置及植物再分化过程

胡萝蔔组织培养

一、实验目的

学习组织培养方法，了解癒合组织的形成和培养基配置及植物再分化过程。

二、实验原理

处理分生组织较旺盛的细胞，形成癒伤组织（callus）再由癒伤组织分化为根、芽等植物各部，继续培养成完整植株。以植物组织为培植体，在适当的培养基上诱发不定芽，发芽可长出自培植体所生之癒合组织；或将癒合组织与原培植体分离增殖，移植至适当培养基上诱发不定芽，可使繁殖速率增高。

培养基成分上常用之生长素为IAA、IBA、NAA、2,4-D，生长素有促进不定根及抑制不定芽发生作用，在诱发不定芽形成时常须要降低生长素浓度，以期避免根之形成而无不定芽。另一个植物激素为细胞分裂素，常用者有萎黄素（Kinetin）、玉米素（Zeatin）、苯甲腺漂呤（Benzyladenine）等，它具有促进不定芽发生之效果，对发根有抑制作用。在培养时与生长素有互相影响，一般以细胞分裂素之浓度较高时，有不定芽发生，当两种混合使用，也可促进不定芽发生之效果。

三、实验方法

1.将所有器皿洗淨

2.配置培养基，分装入组织培养瓶中，于Autoclave高温灭菌40分钟，取出后待其凝固使用。（需另外準备无菌水）

3.以下部分在无菌是中操作，取胡萝蔔根用中性洗剂洗涤浸入2~1.5%次氯酸钠溶液30分钟后，移入无菌水中浸洗数次，用消毒过刀片切下5mm厚的组织片，以切口处平贴在培养基上。置于恒温箱中40~60天（温度25℃）

4.癒合组织再分化—以胡萝蔔根的形成层进行逆分化实验，再由癒合组织进行再分化条件，使其分化为跟或芽。