细胞培养相位差显微镜,细胞计数器,细胞培养箱厂商
信息分类：生命科学资讯 作者:YIYI发布
细胞培养相位差显微镜,细胞计数器,细胞培养箱厂商
材料：
A549 细胞株 (肺泡上皮细胞)
培养基：A549 培养基
F12K medium (Gibco Life) 500ml
胎牛血清
50ml
盘尼xi林/链霉素
5ml
清洗液：PBS (Phosphate buffered saline) 1X 溶液
蛋白质溶解液：Trypsin 0.5%
染料：trypan blue 0.04% (Gibco Life)
T75 培养瓶
仪器：
细胞计数器
相位差显微镜
细胞培养箱
方法：
1.将冷冻管置于 37℃水浴中迅速解冻后，以 70%酒精擦拭管壁及管口，在
无菌操作台内用无菌吸管将细胞溶液放入 5—10ml 温热培养基，离心
1000rpm 5 分钟，以去除冷冻保存剂 (DMSO)。
2.移去上清液，加入新鲜培养基，将细胞均匀混合于培养基中，移入 T75
flask。
3.放入培养箱内培养。(培养条件：37℃、5%CO2、100%湿度)
4.在解冻培养后 24 小时内更换培养基。
5.培养 3-4 天需更换培养基。
6.当细胞长满培养瓶时，需进行继代培养。
7.移去 A549 培养基，加入 10ml PBS 缓衝液洗涤细胞 2 次后移去。
8.加入 0.5ml 5% trypsin，使其能 rinse 所有细胞，之后放入培养箱内作用 3分钟。
9.拿出后拍打培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入 10ml 新鲜培养基，均匀混合
后转移至新的培养瓶中。
10.取 10μl 细胞悬浮液和 10μl 0.04% trypan bule，混合均匀，滴入计数片
中，计算角落四格之细胞数，带入以下公式，即可算出细胞数
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