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细胞培养基若培养细胞观察实验-专业科学显微镜

信息分类:生命科学资讯  日期: 2013-9-24 22:46:55  作者:YIYI发布 

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细胞培养基若培养细胞观察实验-专业科学显微镜

培养细胞于基质中
(1) 细胞培养基若培养细胞一段时间,因为代谢物的产生多具酸
性,使培养基变色为黄橘色,此时应考虑更新培养基,以维
持细胞的正常生理与生长状况。
细胞培养实验
设备
(1) 无菌无尘操作台  (2) 二氧化碳培养箱
(3) 相位差倒立显微镜 (4) 37℃恒温水浴槽
(5) 微量自动吸管     (6) 自动吸取器
(7) 血球计数器(hemacytometer)
材料
(1) 细胞液         (2) DMEM-10% FBS
(3) trypsin-EDTA   (4) DPBS
(5) 巴士德无菌吸管  (6) 灭菌处理好之基质骨架
(7) 15 mL 无菌离心管
(8) 5 mL, 10 mL 无菌吸管

实验方法
(1) 预先以 75% 酒精浸泡基质至少两小时。
(2) 以 DPBS 清洗数次,置于无菌操作台内风干。
(3) 细胞于培养皿中,如实验二以酵素 trypsin-EDTA 处理细胞,
实验三计算细胞总数,并移至 15 mL 离心管中,离心 1,000
rpm,3 分钟后,以烧过的巴士德无菌吸管小心的移去上清液。
(4) 计算细胞总数后,估算培养基添加量,以得到 2x10
6cells/mL之细胞液。
(5) 加入所估算添加量的新鲜 DMEM-10% FBS 培养基于含细胞
之离心管中,以吸管上下吸放约 20 次,以充分打散细胞。
(6) 最后加入 100 μL细胞液至含基质骨架之 96-well培养皿中,放
入含 5% CO2之 37℃二氧化碳培养箱培养。
(7) 1 小时后于显微镜下观察细胞附着于基质骨架的情形,此时
大部份细胞应已趴附于基质骨架。
(8) 经过适当培养时间后吸掉培养基,以 10% 福马林溶液固定,
可进行共轭聚焦显微镜或原子力显微镜之观察

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