霉菌代谢试验观察用倒置生物显微镜厂商
信息分类：生命科学资讯 作者:YIYI发布
霉菌代谢试验观察用倒置生物显微镜厂商
血清学的性状：
黴浆菌之同定上，以对应之标準抗血清的作用与否，为最确实之準则。
A、 发育阻止试验：
黴浆菌于培养基中培养时，若有对应之抗血清存在下，菌体被抗血清中和，其发育将受阻止，
故可利用此现象以同定其种别。
抗血清的制作：
(a) 将标準菌株经液体培养基大量培养3~7天后 (3000~5000ml)，以30000 G三次远心洗涤，
浓缩成原菌液量的1/50~1/100倍之菌液，分注于小试管2ml置-70℃备用。
(b) 将浓缩抗原与等量的Freund complete adjuvant混合后以1ml皮内注射家兔；
3周后抗原与等量的Freund incomplete adjuvant混合后，以1ml皮内注射；
经3周后以不加adjuvant之抗原2ml腹腔内注射，1周后采血分离血清。
(c) 抗血清滤纸的制作：将直径8mm之滤纸吸取标準抗血清后，
置于4~10℃水箱内使其乾燥，然后改置于-20℃保存备用。
(d) 发育阻止试验术式：待测检体经液体培养基37℃ 24~48小时培养后，
取0.5ml接种至固体培养基，令其全面覆盖培养基面，置于37℃，把皿盖稍为打开，
让皿内之液体蒸发乾燥后；把抗血清滤纸置于培养基面上，然后倒置于5% CO2，
37℃培养箱内培养，经2~3天培养，观察其发育阻止圈，若检验体与抗血清为同种时，
则可见明显发育阻止圈，否则无发育阻止圈形成。
B、 代谢阻止试验：
黴浆菌于培养基中发育时产生代谢物质，将引起pH值之变化，致培养基中的色调有所改变，
故于培养基中加入对应抗血清时，将阻止黴浆菌的发育，相对地其代谢活性也受阻，
培养的色调变化也有受阻现象，故以此理可同定黴浆菌的种别。
(a) 代谢阻止试剂之配制：各以Hayflick之处方为基础培养基
【2.1% PPLO broth W/O cv (Difco) 7%；马血液2%；25%新鲜酵母抽出液1%；
Thalium acetate 1 : 2000；青黴素G 500 u/ml；phenol red 0.002%】
分别加入被检物质如1%葡萄糖，L-arginine，2,3,5-triphenyltetra zolium chloride等，
并把pH调整至7.4~7.6，再分别以3ml分装于小试管，置于4~10℃备用。
(b) 代谢阻止试验术式：经18~24小时培养于液体培养基之检体，
分别以上述各被检物质培养液稀释成104CFU/ml；同样以各被检物质培养液把
抗血清依2倍释稀法稀释成40~640倍不同稀释倍数；然后由不同稀释倍之血清中各取0.25ml，
黴浆菌稀释液0.5ml，分别与各代谢阻止试验用之培养液1.25ml混合之；经37℃，3~7日培养观察，
若有色变即为阳性反应。也即是检体与抗血清为同种。
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