电子显微镜的缺点是成像需要较长的扫描时间
信息分类：生命科学资讯 作者:YIYI发布
电子显微镜的缺点是成像需要较长的扫描时间
可以用于单分子检测的光学成像方法主要包括四种:近场扫描
光学显微镜(NSOM )、激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)、广场落射式
荧光显微镜、全内反射荧光显微镜(TIRFM)
NSOM是在扫描探针显微镜基础上，结合光学探测方法而发展起来的，可以达到
SO- 100nm址级的超衍射的空间分辨率(比可见光的衍射极限高出5-10倍)。NSOM
与AFM的特点十分相似，都是样品近距离观测(sample proximity method)、应用扫
描探针、侧向分辨率高(10^-100nm)、只能检测固体分子等。另外，因为激发容积小，
它的信噪比很高。目前，NSOM已经应用到支持物或细胞膜上的单个荧光团成像、
波谱分析及FRET检测。虽然NSOM具有较高的分辨率，在单分子探测的研究中发挥了
很重要的作用，但是它也受一定的限制。例如，在扫描时需要通过复杂的控制系统来保
持样品与探针针尖之间适当的距离;由于光纤及其尖部的限制，输出光的强度有限，对
于50-100nm的尖端输出能员只能在1^-50nW;探针针一尖的再生率非常低;镀铝的探
针针尖能影响荧光的发射寿命和强度，因为金属铝对分子的激发态有淬灭的作用。
CSLM的主要优点是能进行三维成像，信噪比较高，目前已经用于单分子FRET检测、
光谱分析、动力学检测等。它的主要缺点是成像需要较长的扫描时间。
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