显微镜下观察叶绿体是植物进行光合作用的细胞器
信息分类：生命科学资讯 作者:YIYI发布
显微镜下观察叶绿体是植物进行光合作用的细胞器
叶绿体的分离制备
叶绿体是植物进行光合作用的细胞器，富含于叶肉细胞内.分离和制备有活性的离体
叶绿体是研究叶绿体结构与功能、光合作用机理及其遗传控制的重要技术条件。根据分离
所得叶绿体的完整程度，大致可分为被膜破碎的破碎叶绿体和被膜的完整叶绿体两类。
前者具有光合放氧和光合磷酸化的功能，后者则具有完全的光合作用功能。
分离和制备叶绿体的方法很多，目前最常用的方法是采用差速离心技术进行分部离心。
一般叶绿体的直径约为几个微米，因此细胞破碎后.在较低的离心力范田内即能分离沉淀出
叶绿体。
(1)材料的选择:分离和制备叶绿体最常用的高等植物材料有菠菜、碗豆、玉米、大麦等。
低等植物中的衣藻、小球藻等也是常用的材料。
(2)叶绿体制备液的组成:用于分离制备叶绿体的溶液系统包括缓冲液.如Tris-HCI
Hepes,Tricine(N-3赴甲基甘氨酸)和磷酸缓冲系统等.渗透刘，如甘露糖醉,tU梨醉、蔗糖
和NaC1等，以及其他一些保护性物质，如EDTA, MgCI:和抗坏血酸等.
(3)叶绿体的分离程序:下面以制备菠菜叶片叶绿体为例，以简要说明制备叶绿体的操
作程序。取新鲜菠菜叶片剪成小段.加人6倍量的制备液匀浆，用纱布或尼龙网过滤，滤液
在500 X g下离心2 min，除去细胞壁及其他细胞碎片，上清液在1000---1200 X g下离心
5-10 min即可得到叶绿体沉淀。将其悬浮在提取介质中0℃ -4℃下保存。
注意分离所用的试剂、器皿都需要事先在1℃~ 4℃下预冷，整个操作也应在低温’F进
行，并要求尽量迅速.以免影响叶绿体的完整性和生理活性.
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