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破伤风杆菌Clostridium tetani结论!破伤风杆菌观察用显微镜采购!

信息分类:生命科学小百科    作者:YIYI发布 

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破伤风杆菌Clostridium tetani结论!破伤风杆菌观察用显微镜采购!

实验名称:Spore stain
 
实验原理:
  因为孢子类似抗酸菌很难被染色。如用普通染色法则菌体是深色,孢子却因染不上而呈现透明。所以,
要采用Wirtz-Conklin method染孢子,染上色后将如同结核菌一样无法用脱色剂脱色。

实验目的:
  观察Clostridium tetani(破伤风杆菌)和Clostridiumsporogenes经过Spore stain后所呈现的形状。

实验材料:薄抹片、malachite green(5%)、火焰、Safranin、显微镜油镜。

实验方法:Wirtz-Conklin method如下:
制作薄抹片,加入malachite green(5%)。
用火焰在其下慢慢轻轻地烧,见其产生白烟,稍微移开后再烧。如此持续5min.,促使孢子上色。
背面冲水后,将水甩掉。
用Safranin(番红)做背景染色30sec.。
背面冲水后,在空气中待其乾燥。
用显微镜油镜镜检。 


实验结果:孢子的地方染上绿色后即不易脱色,其他地方则呈现背景颜色(红色)。 
Clostridium tetani(破伤风杆菌)形成terminal spore,状似鼓棒(drum stick)。Spore处是绿色,杆状处是红色。
Clostridium sporogenes犹如糖果状,中央孢子处是绿色,两旁是红色。 

实验讨论:
  Clostridium tetani (破伤风杆菌)除了可以用镜检外还可用体外隔离,不过这两种方法都不是很成功。
Clostridium sporogenes和Clostridium tetani一样在镜检下也不是很成功,通常是因为孢子不易染色的关系。 
  Clostridium tetani和Clostridium sporogenes都是厌气菌,为了作为实验材料而培养时,用猪肝、猪肝汤再经高温、
高压灭菌作为medium的效果很好(可能是因为养分充足,有glutathione,作用类似cystine、arginine为还原剂,可将O2锁住的关系)。

  Clostridium tetani可以从临床上来诊断,病人通常有伤口、牙关紧闭(由于三叉神经运动分支障碍,导致咀嚼肌强直,病人的嘴不由自主地紧闭,称为trismus或lockjaw)、且曾有免疫缺失的情况。若直接从伤口取出Clostridium来做抹片染色的材料,并不能确认一定是C. tetani。所以取出后可以直接在blood agar或转移到cooked meat medium(加热800C,10~15min.以破坏非孢子物)。在blood agar经过24小时的培养后,将发现呈现聚集的情况(因为C. tetani是有运动性的)。 
  经过Spore stain后,将发现犹如网球拍状的terminal spores。 
  进一步的确认是藉由侦测它的neurotoxin产物。方法是从C. tetani的纯培养液中抽取滤液并注射到老鼠腿中,另一只则多加了tetanus antitoxin。几个小时后,未受保护的老鼠腿部出现僵硬和肌肉痉挛并延伸到尾部,然后到另一条腿上。受保护的老鼠则倖免于难。 
  Clostridium sporogenes是一种非致病性的细菌。它通常和Clostridium perfringens (Welch's bacillus),Clostridium novyi,和Clostridium septicum等细菌一起存在。它们如同腐生菌般存在于土壤和人及动物的肠道。当伤口接触到被粪便汙染的土壤,感染就发生了。大部分绝对厌氧、产毒、可形成孢子的G(+)细菌便会感染伤口而造成一种致命的疾病,我们称为Gas gangrene(气性坏疽)或Clostridial myonecrosis、Clostridial myositis。有75%与Cl. perfringens相关,1/3是以Cl. perfringens为致病原。
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