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观察动物细胞显微镜-常用的转染方法简介

信息分类:生命科学资讯  日期: 2013-5-4 23:48:57  作者:YIYI发布 

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观察动物细胞显微镜-常用的转染方法简介



  动物基因的转移感染(transfection)作用是将动物的DNA或RNA(甚至是protein)转送进入活体细胞中。
目前,基因转染技术已成为研究基因转殖(transgene)与表达之重要工具,转染作用通常分为过渡性转染
(transient transfection)及稳定性转染(stable transfection)两种类型。
前者是将DNA送入活细胞内,但DNA不会嵌入细胞的染色体中,其基因表达分析一般可在2~3天内进行。
后者是将DNA传送入活细胞,被送入细胞内的DNA不是嵌入染色体DNA,而是成为基因附体(episome)存在于细胞内。
一般而言,环状质体DNA之过渡性转染效果较佳,而直线状质体DNA则在稳定性转染上效果较佳。



  目前,基因转染技术常被应用于基因表达之分析研究上,转染前细胞株之选择及测试技术颇为重要,
直接影响基因转殖与表达研究的成败。

常用的转染方法有如下几种:(1)磷酸钙(calcium phosphate),(2)DEAE-dextran,(3)脂小体(liposome),
(4)电穿孔(electroporation),(5)显微注射(microinjection),(6)病毒感染(retrovirus infection),
(7)基因枪(gene-gun)等。前两项方法是以化学物质创造一个化学反应环境,让DNA附着到动物细胞之表面,
然后DNA被动物细胞所吞噬。以脂小体为媒介的方式,其主要机制虽不全然清楚,

但DNA带负电之磷酸根会与脂小体表面之正电荷结合,脂小体带正电荷的部分又会与细胞表面带负电荷的唾液酸
(sialic acid)结合,藉以进行转染。电穿孔则藉电流方式进行。

显微注射是在显微镜的帮助下,直接以微细针管将物质穿刺细胞打入。病毒感染是利用多种不同的病毒特性,
将DNA改造成病毒的一部份,另外病毒本身致癌基因或有害人类健康的基因也加以改造,再藉病毒感染方式送入基因。
基因枪是一种粒子枪法(microprojectile bombardment),欲送入的基因可涂裹在细微的粒子子弹上,
再被推压如散弹方式射入目标细胞或组织中。除以上所提七种方式外,在植物基因转殖(transgenic plant)上,
另可利用农杆菌媒介(Agrobacterium-mediated)方式,首先把基因接上载体,
再把载体导入农杆菌,藉由农杆菌为媒介,把外来基因导入植物细胞。
本文由出自上海光学仪器厂,转载请注明