使用荧光显微镜观察记数器玻片上的细胞
信息分类：生命科学资讯 作者:YIYI发布
使用荧光显微镜观察细菌记数器玻片
内容分析如下
（样品准备）将样品菌液取出后，以 10,000 x g 离心5分钟，加入预先准备的稀释染液,
（染色原理）而稀释染液的备制是先将染剂套组内的两种核酸染剂，利用两染剂对细胞膜的穿透能力不同来区分活菌或死菌，
其中SYTO 9能穿透完整或受伤的细胞膜进行核酸的标记 ，而propidium iodide 仅能穿透受伤的细胞膜，且会与SYTO 9竞争核酸标记的位置，
（染色结果）使死菌或受伤的菌体染成荧光红色；活菌则呈现荧光绿色。
（染色步骤）将SYTO 9 和 propidium iodide 做等倍体积混合，再取 3 μl
混合染剂至1ml以0.2 μm滤膜过滤之无菌的 0.5% NaCl 盐水溶液稀释。当菌体在黑暗操作染色处理30分钟后，
（观察计数）取菌液置于细菌记数器玻片上，至少取五个以上视野使用荧光显微镜观察照相，
细菌记数器玻片深度为0.02 mm乘上一视野的表面积求得菌液的体积，再换算计数成每毫升菌液中的总活菌数目。
如何计数活菌数？取出样品菌液后，离心5分钟（10000xg）（取菌体？菌液？），在黑暗中加稀释染液30min，
至于记数器玻片上，并取5个以上进行荧光显微镜照相，最后0.2nm野表面积＝菌液体积，再计算总菌菌数/菌液（ml），
其中稀释染剂利用SYTO9测活菌，呈荧光绿色，propidium iodide测死菌或受伤的菌，呈荧光红。
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