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冰冻切片的操作步骤-昆虫研究体视图像显微镜

信息分类:生命科学资讯    作者:YIYI发布 

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冰冻切片的操作步骤-昆虫研究体视图像显微镜

    1.将冰冻附着器连接在切片机与二氧化碳钢筒之间,旋开标本台后的开关,
再将钢筒口上的开关打开,随即不停地开、闭标本台后的开关,检查气体喷出的程度。
气体喷出时,能听到嘘嘘声,同时看到标本台上有白霜状的附着物,

这就证明钢筒贮存物确系液态二氧化碳。这时可将钢筒开关紧闭待用。若喷出气体时,
只能听到很高如金属性噪音而又无白霜物出现,这表示贮存的液态二氧化碳气体已用
尽,应即重新贮入再用。

    2.将标本台用水湿润到适宜程度即将组织块(新鲜的组织快,或固定后经水洗的
组织块)放在上面。关闭标本台后的开关并将二氧化碳钢筒上的开关稍微打开,
随后再有节奏地来回开、闭标本台后的开关,使气化的二氧化碳不时从标本台喷出,
使组织块冻结。

    3.在冻结组织块的同时,标本台侧面的小孔,应对着切片刀,使刀片的温度亦随着下
降并调节切片的厚度(约15-20微米)和转动标本台的升降把手,使冰冻组织块的上端与
·切片刀相接为止。

    4.当组织块表面呈现轻微的溶化时即开始切片。切割后若在刀片上出现白色而脆的
飞散碎片,表示组织块太硬,若为松软的粥状则又冻结不足。为了避免这种缺点,
可将组织块冻结得稍微过硬,然后用手指按在块上,待表面轻微溶化,
即可连续切下几个适用的切片。

    5.切下的切片附着在刀片上,可用湿润的毛笔将它扫入盛水的培养皿中。
切片应平摊,在水面或沉在水底。如切片卷起,应该用毛笔将它摊平。

    6.将贮存切片的培养皿放在黑纸上,选择好的切片,然后把已涂梅氏蛋
白液的载玻片的一端浸在培养皿水中,用毛笔将切片带到载玻片上摊平,
将载玻片移出水面,用吸水纸吸干水分(可用手指在切片上稍压),并立即滴几滴
纯酒精于切片上。

30秒钟后吸干酒精,再滴上另外的纯酒精,数秒钟后,继续将它吸干。
待酒精尚未干涸时,在切片上立即滴上10%的火棉胶溶液(火棉胶1克,纯酒精50毫升,乙醚50毫升),
并随手将玻片倾斜,使多余的火棉胶溶液流掉,随即将载玻片经过83%到70%酒精处理。
至此,在切片上已形成一薄层火棉胶,切片保持在里面不易脱落了。


    7.将涂有火棉胶的冰冻切片从酒精移回到水中,然后选用适合于制片目的的各种不同
的染色方法进行染色,随后依次进行脱水、透明和封藏。
    采用明胶一冰冻切片法时,组织块经固定、冲珠,即浸入10%的明胶溶液(明胶2克
加入10%的苯酚水溶液20毫升).,在37℃温箱中24小时,使明胶充分透入,再移入25%的
明胶溶掖中(明胶5克加入1%的苯酚水溶液20毫升),37℃, 12-24小时。然后用一纸盒
倾入新的25%明胶液,把组织块放入盒内摆好位置,移入冰箱中使其冷却凝固即完成包埋
过程。已凝固的明胶块用小刀修整,因明胶防碍冰冻,仅留2一3毫米的胶边,支持标本
即可。让修整好的明胶块在空气中把水分蒸发,即投入10%福尔马林榕液硬化12-24小时。

切片前将明胶块放入水中洗涤10-30分钟即可在冰冻切片机上切片,然后贴片、染
色、脱水、透明和封藏。尚须指出,用明胶包埋的切片遇90%以上的酒精时,将引起
收缩。因此,在染色和封藏时,宜采用水溶性染色剂和封藏剂。

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